20190114專題報告-clone製作初級版108年

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00:00 1.
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00:22 2.
 Clone的由來
01:20 3.
clone本身運作所需的(backbone)
03:03 4.
 MCS的原理
07:55 5.
clone本身運作所需的(backbone)
10:04 6.
 MCS的原理
10:55 7.
-單切與雙切
11:04 8.
 MCS的原理
12:01 9.
-單切與雙切
12:04 10.
 MCS的原理
14:14 11.
-單切與雙切
17:18 12.
 MCS的原理
17:39 13.
-單切與雙切
19:24 14.
-限制酶辨認序列特性
19:26 15.
-單切與雙切
19:30 16.
-限制酶辨認序列特性
24:26 17.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
24:35 18.
-限制酶辨認序列特性
26:36 19.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
39:24 20.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
39:25 21.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
40:09 22.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
44:00 23.
 primer的設計
45:56 24.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
45:57 25.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
46:07 26.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
46:07 27.
 primer的設計
48:27 28.
-insert與backbone濃度的比例-黏合的時間
50:02 29.
 primer的設計
50:02 30.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
50:03 31.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
50:03 32.
-限制酶辨認序列特性
50:04 33.
-單切與雙切
50:04 34.
 MCS的原理
50:04 35.
clone本身運作所需的(backbone)
50:19 36.
 MCS的原理
50:20 37.
-單切與雙切
50:20 38.
-限制酶辨認序列特性
50:21 39.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
50:21 40.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
50:22 41.
 primer的設計
50:23 42.
-insert與backbone濃度的比例-黏合的時間
50:25 43.
-微脂體(liposome)-電穿孔(electroporation)-反轉錄病毒(retrovirus)-農桿菌(agrobacterium)-基因槍(gene gun)、顯微注射(microinjection)
50:32 44.
-insert與backbone濃度的比例-黏合的時間
53:00 45.
-微脂體(liposome)-電穿孔(electroporation)-反轉錄病毒(retrovirus)-農桿菌(agrobacterium)-基因槍(gene gun)、顯微注射(microinjection)
54:38 46.
Backbone給誰用----微脂體 -反轉錄病毒-電穿孔 -農桿菌-基因槍、顯微注射
54:38 47.
-微脂體(liposome)-電穿孔(electroporation)-反轉錄病毒(retrovirus)-農桿菌(agrobacterium)-基因槍(gene gun)、顯微注射(microinjection)
54:41 48.
Backbone給誰用----微脂體 -反轉錄病毒-電穿孔 -農桿菌-基因槍、顯微注射
54:41 49.
-微脂體(liposome)-電穿孔(electroporation)-反轉錄病毒(retrovirus)-農桿菌(agrobacterium)-基因槍(gene gun)、顯微注射(microinjection)
54:43 50.
Backbone給誰用----微脂體 -反轉錄病毒-電穿孔 -農桿菌-基因槍、顯微注射
56:27 51.
 質體的轉殖-轉殖控制組
1:01:08 52.
-QPCR-WB-Function-抗菌斑測試-冷光測試
1:03:05 53.
-抗生素篩選-換轉殖方式-換轉殖系統-換轉殖條件 (濃度, 時間…)-換backbone-換細胞株
1:03:07 54.
-QPCR-WB-Function-抗菌斑測試-冷光測試
1:03:51 55.
-抗生素篩選-換轉殖方式-換轉殖系統-換轉殖條件 (濃度, 時間…)-換backbone-換細胞株
1:03:53 56.
-QPCR-WB-Function-抗菌斑測試-冷光測試
1:04:31 57.
-抗生素篩選-換轉殖方式-換轉殖系統-換轉殖條件 (濃度, 時間…)-換backbone-換細胞株
1:05:41 58.
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講者：aspirin

日期：2019-01-14

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 Clone的由來
01:20 3.
clone本身運作所需的(backbone)
03:03 4.
 MCS的原理
07:55 5.
clone本身運作所需的(backbone)
10:04 6.
 MCS的原理
10:55 7.
-單切與雙切
11:04 8.
 MCS的原理
12:01 9.
-單切與雙切
12:04 10.
 MCS的原理
14:14 11.
-單切與雙切
17:18 12.
 MCS的原理
17:39 13.
-單切與雙切
19:24 14.
-限制酶辨認序列特性
19:26 15.
-單切與雙切
19:30 16.
-限制酶辨認序列特性
24:26 17.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
24:35 18.
-限制酶辨認序列特性
26:36 19.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
39:24 20.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
39:25 21.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
40:09 22.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
44:00 23.
 primer的設計
45:56 24.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
45:57 25.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
46:07 26.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
46:07 27.
 primer的設計
48:27 28.
-insert與backbone濃度的比例-黏合的時間
50:02 29.
 primer的設計
50:02 30.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
50:03 31.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
50:03 32.
-限制酶辨認序列特性
50:04 33.
-單切與雙切
50:04 34.
 MCS的原理
50:04 35.
clone本身運作所需的(backbone)
50:19 36.
 MCS的原理
50:20 37.
-單切與雙切
50:20 38.
-限制酶辨認序列特性
50:21 39.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
50:21 40.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
50:22 41.
 primer的設計
50:23 42.
-insert與backbone濃度的比例-黏合的時間
50:25 43.
-微脂體(liposome)-電穿孔(electroporation)-反轉錄病毒(retrovirus)-農桿菌(agrobacterium)-基因槍(gene gun)、顯微注射(microinjection)
50:32 44.
-insert與backbone濃度的比例-黏合的時間
53:00 45.
-微脂體(liposome)-電穿孔(electroporation)-反轉錄病毒(retrovirus)-農桿菌(agrobacterium)-基因槍(gene gun)、顯微注射(microinjection)
54:38 46.
Backbone給誰用----微脂體 -反轉錄病毒-電穿孔 -農桿菌-基因槍、顯微注射
54:38 47.
-微脂體(liposome)-電穿孔(electroporation)-反轉錄病毒(retrovirus)-農桿菌(agrobacterium)-基因槍(gene gun)、顯微注射(microinjection)
54:41 48.
Backbone給誰用----微脂體 -反轉錄病毒-電穿孔 -農桿菌-基因槍、顯微注射
54:41 49.
-微脂體(liposome)-電穿孔(electroporation)-反轉錄病毒(retrovirus)-農桿菌(agrobacterium)-基因槍(gene gun)、顯微注射(microinjection)
54:43 50.
Backbone給誰用----微脂體 -反轉錄病毒-電穿孔 -農桿菌-基因槍、顯微注射
56:27 51.
 質體的轉殖-轉殖控制組
1:01:08 52.
-QPCR-WB-Function-抗菌斑測試-冷光測試
1:03:05 53.
-抗生素篩選-換轉殖方式-換轉殖系統-換轉殖條件 (濃度, 時間…)-換backbone-換細胞株
1:03:07 54.
-QPCR-WB-Function-抗菌斑測試-冷光測試
1:03:51 55.
-抗生素篩選-換轉殖方式-換轉殖系統-換轉殖條件 (濃度, 時間…)-換backbone-換細胞株
1:03:53 56.
-QPCR-WB-Function-抗菌斑測試-冷光測試
1:04:31 57.
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 Clone的由來
01:20 3.
clone本身運作所需的(backbone)
03:03 4.
 MCS的原理
07:55 5.
clone本身運作所需的(backbone)
10:04 6.
 MCS的原理
10:55 7.
-單切與雙切
11:04 8.
 MCS的原理
12:01 9.
-單切與雙切
12:04 10.
 MCS的原理
14:14 11.
-單切與雙切
17:18 12.
 MCS的原理
17:39 13.
-單切與雙切
19:24 14.
-限制酶辨認序列特性
19:26 15.
-單切與雙切
19:30 16.
-限制酶辨認序列特性
24:26 17.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
24:35 18.
-限制酶辨認序列特性
26:36 19.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
39:24 20.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
39:25 21.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
40:09 22.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
44:00 23.
 primer的設計
45:56 24.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
45:57 25.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
46:07 26.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
46:07 27.
 primer的設計
48:27 28.
-insert與backbone濃度的比例-黏合的時間
50:02 29.
 primer的設計
50:02 30.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
50:03 31.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
50:03 32.
-限制酶辨認序列特性
50:04 33.
-單切與雙切
50:04 34.
 MCS的原理
50:04 35.
clone本身運作所需的(backbone)
50:19 36.
 MCS的原理
50:20 37.
-單切與雙切
50:20 38.
-限制酶辨認序列特性
50:21 39.
-左右有別-一型二型-甲基干擾-鈍端與黏端-辨認序列長短-一黏二黏三四五黏
50:21 40.
-目標序列的確認-目標序列的取得 --長的 ---已有序列P的 ---由cDNA P的 ---買的 --短的 ---annealing buffer (10 mM Tris pH 8.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA ) ---濃度 1 ~ 5 OD/100μl。等莫耳數混合。 ---94 ℃ 2 ~ 5 分鐘，然後慢慢冷卻到 25℃ ---T4PNK
50:22 41.
 primer的設計
50:23 42.
-insert與backbone濃度的比例-黏合的時間
50:25 43.
-微脂體(liposome)-電穿孔(electroporation)-反轉錄病毒(retrovirus)-農桿菌(agrobacterium)-基因槍(gene gun)、顯微注射(microinjection)
50:32 44.
-insert與backbone濃度的比例-黏合的時間
53:00 45.
-微脂體(liposome)-電穿孔(electroporation)-反轉錄病毒(retrovirus)-農桿菌(agrobacterium)-基因槍(gene gun)、顯微注射(microinjection)
54:38 46.
Backbone給誰用----微脂體 -反轉錄病毒-電穿孔 -農桿菌-基因槍、顯微注射
54:38 47.
-微脂體(liposome)-電穿孔(electroporation)-反轉錄病毒(retrovirus)-農桿菌(agrobacterium)-基因槍(gene gun)、顯微注射(microinjection)
54:41 48.
Backbone給誰用----微脂體 -反轉錄病毒-電穿孔 -農桿菌-基因槍、顯微注射
54:41 49.
-微脂體(liposome)-電穿孔(electroporation)-反轉錄病毒(retrovirus)-農桿菌(agrobacterium)-基因槍(gene gun)、顯微注射(microinjection)
54:43 50.
Backbone給誰用----微脂體 -反轉錄病毒-電穿孔 -農桿菌-基因槍、顯微注射
56:27 51.
 質體的轉殖-轉殖控制組
1:01:08 52.
-QPCR-WB-Function-抗菌斑測試-冷光測試
1:03:05 53.
-抗生素篩選-換轉殖方式-換轉殖系統-換轉殖條件 (濃度, 時間…)-換backbone-換細胞株
1:03:07 54.
-QPCR-WB-Function-抗菌斑測試-冷光測試
1:03:51 55.
-抗生素篩選-換轉殖方式-換轉殖系統-換轉殖條件 (濃度, 時間…)-換backbone-換細胞株
1:03:53 56.
-QPCR-WB-Function-抗菌斑測試-冷光測試
1:04:31 57.
-抗生素篩選-換轉殖方式-換轉殖系統-換轉殖條件 (濃度, 時間…)-換backbone-換細胞株
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位置

資料夾名稱

Clone製作 (品豪)

發表人

賴亮全

單位

賴亮全教授

建立

2019-01-23 14:27:04

最近修訂

2019-01-23 14:27:04

長度

1:05:44