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2019/06/13
管理者:
劉家銘, 黃照穎, 周楷軒, 朱庭汶, 黃鈺涵
  1. 知識庫
  2. 目錄總覽
  3. 公用實驗指南 (Experimental Protocol)
  4. 公用實驗指南 (Experimental Protocol)
  5. 常見 Q&A
管理者：劉家銘, 黃照穎, 周楷軒, 朱庭汶, 黃鈺涵
  1. 1.
    dna electrophoresis
  2. 2.
    Gel Extraction
  3. 3.
    Cell culture
  4. 4.
    RNA extraction
  5. 5.
    Transform
  6. 6.
    qPCR
  7. 7.
    reverse transcriptiase PCR
  8. 8.
    Western blot
  9. 9.
    MTT assay
  10. 10.
    Wound Healing assay
  11. 11.
    Luciferase reporter assay
  12. 12.
    primer設計
  13. 13.
    其他
  1. 1.
    dna electrophoresis
      1. Q1.
        跑RNA、蛋白質的膠有什麼不一樣?
      2. Q2.
        nucleic acid stain 是什麼有沒有毒？怎麼產生band?
      3. Q3.
        知道分子量大小可以做什麼?
      4. Q4.
        跑電泳的目的?
      5. Q5.
        MARKER怎麼來的?
      6. Q6.
        dna怎麼切?
      7. Q7.
        怎麼知道液體內DNA的質量?
      8. Q8.
        什麼物質吸收260mm、280mm、230mm?分光光度計怎麼濃度及純度及核酸(DNA,RNA)?
      9. Q9.
        OD值?
    1. 2.
      Gel Extraction
        1. Q10.
          為什麼要除膠?
        2. Q11.
          dna 定序實驗?
        3. Q12.
          ngs primer是怎麼設計的?
        4. Q13.
          第二代定序為什麼要把dna打碎?
        5. Q14.
          Illumina定序中加了什麼只有一個核苷酸接上?接上去為什麼又可繼續接其他核甘酸?
      1. 3.
        Cell culture
          1. Q15.
            挑到雜菌的困擾?
          2. Q16.
            什麼是Trypsin？
          3. Q17.
            什麼是 Trypan blue？
          4. Q18.
            開血清管或離心管的蓋子時發現paraffin容易殘留、撕不完全，怎麼辦？
          5. Q19.
            細胞容易漂或長得慢怎麼辦?
          6. Q20.
            顯微鏡下看起來沒有長其他的東西、medium也沒有變色，就代表細胞沒有汙染嗎？
          7. Q21.
            若cell有Mycoplasma汙染，該怎麼辦？
          8. Q22.
            Mycoplasma汙染會影響什麼？
          9. Q23.
            Mycoplasma的污染來源是？
          10. Q24.
            不同cell line的生長速度和所需的medium內容物和比例會不同嗎？
          11. Q25.
            種細胞時可否不要配mix液體？分開算每一格需要多少細胞液，加完後再補medium
          12. Q26.
            如何從生物個體的細胞在 實驗室中持續生長immotalization?
          13. Q27.
            端粒是什麼?端粒為什麼會縮短？端粒酶怎麼將縮短的片段補回來?
          14. Q28.
            knock out 、knock down 區別?
          15. Q29.
            細胞有哪幾種死法?
          16. Q30.
            切dna單股、雙股的酶是什麼?
          17. Q31.
            apoptosis、necrosis怎麼測處在哪個階段?怎麼測量他處於哪種死法(-ptosis)?
          18. Q32.
            怎麼knock out?crispr?
          19. Q33.
            怎麼knock down?si RNA 、shRNA?怎麼做讓基因表現量降低?
          20. Q34.
            細胞融合(HYBRIDOMA)?
          21. Q35.
            質體(plasmid)?載體(VECTOR)?兩者差別?
          22. Q36.
            基因工程?黏上的酶是什麼?與DNA 聚合酶差別?
          23. Q37.
            慢病毒、逆轉錄病毒或腺病毒?慢病毒是常用的病毒為什麼大家常用(好處)?
          24. Q38.
            怎麽將質體送入細胞內？
          25. Q39.
            death signal pathway ？
          26. Q40.
            HE STAIN ?
          27. Q41.
            流式細胞術（FACS）是什麼?
          28. Q42.
            HAT培養基特點?
        1. 4.
          RNA extraction
            1. Q43.
              各步驟的目的是什麼？
            2. Q44.
              為何我們實驗室是使用NucleoZOL而非TRIzol？
            3. Q45.
              如何確認真的有抽到完整的RNA？ 除了紫外光分光光度計(OD值:260nm,280nm.230nm)以外的方法
            4. Q46.
              抽DNA與RNA有什麼不同?
            5. Q47.
              酶的作用效率要怎麼看？
          1. 5.
            Transform
              1. Q48.
                什麼是Lysogeny broth (LB)？
              2. Q49.
                抽Mini、Midi和Maxi的差別是？
            1. 6.
              qPCR
                1. Q50.
                  CT值的意義
                2. Q51.
                  SYBR Green 用途
                3. Q52.
                  Melting Curve的意義
                4. Q53.
                  除了18s RNA 外，還有哪些 internal control 可以選擇？
                5. Q54.
                  QPCR的原料有哪些?
                6. Q55.
                  傳統PCR與QPCR差別?
                7. Q56.
                  怎麼定量?
                8. Q57.
                  熒光染料（如SYBR Green）和特異性探針（如TaqMan探針）差別?
                9. Q58.
                  有或沒有proofreading dna 聚合酶作用，什麼時候需要，什麼時候不需要?
                10. Q59.
                  melting curve 的x軸y軸是什麼?
                11. Q60.
                  會校正的dna polymerase叫什麼名字?
                12. Q61.
                  Tm值定義?
                13. Q62.
                  aqMan 探針接在哪裡?怎麼發光?
                14. Q63.
                  sense strand、 anti－sense strand是什麼?
              1. 7.
                reverse transcriptiase PCR
                  1. Q64.
                    為什麼不用oligo dT?
                1. 8.
                  Western blot
                    1. Q65.
                      用甲醇活化PVDF的原理是什麼？
                    2. Q66.
                      Wash buffer: TBST內含Tween 20，它的作用是什麼？
                    3. Q67.
                      抽protein時RIPA+SDS的作用是？
                    4. Q68.
                      第二次做5a的IP壓不到band
                    5. Q69.
                      Western detect不到sema5a
                    6. Q70.
                      為什麼PAGE要分上下膠？
                    7. Q71.
                      PAGE可以拿來跑DNA、RNA嗎?
                    8. Q72.
                      抗原抗體?一種蛋白為什麼會產生多株抗體?
                  1. 9.
                    MTT assay
                      1. Q73.
                        MTT assay的原理是？
                      2. Q74.
                        除了MTT assay外還有哪些偵測cell proliferation的assay？
                      3. Q75.
                        影響MTT數值偵測的關鍵因素是？
                    1. 10.
                      Wound Healing assay
                        1. Q76.
                          多可以拍到多久，也就是實驗可以進行多久？
                        2. Q77.
                          製造缺口的方式有？
                        3. Q78.
                          如何讓每次拍的位子都是一樣的？
                      1. 11.
                        Luciferase reporter assay
                          1. Q79.
                            做Luciferase reporter assay用冷光儀使用注意事項為何?
                        1. 12.
                          primer設計
                            1. Q80.
                              為何qPCR primer產物長度不能太長?
                            2. Q81.
                              何為melting temperature?和Annealing temp的關係為何?
                            3. Q82.
                              何為Self complementarity、 Self 3' complementarity?
                            4. Q83.
                              何為primer dimer(引子二聚體)?
                            5. Q84.
                              Taqman的原理?為何產物可以設計長一點?
                            6. Q85.
                              在rtPCR，設計primer要靠近RNA的5'端還是3'端?原因?
                            7. Q86.
                              要怎麼測試pirmer的PCR條件? 若雜band太多或沒有產物要如何調整?
                            8. Q87.
                              何為OPC?
                          1. 13.
                            其他
                              1. Q88.
                                什麼是T.E buffer？
                              2. Q89.
                                驗證NGS (RNA seq)須注意事項?
                              3. Q90.
                                怎麼製造Nuclease free water?
                              顯示所有媒體的 FAQ (0)

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