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Print date : 2025/03/22
賴亮全實驗室
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Cell Freeze
凍細胞_demo
Duration: 03:32,
Browse: 4399,
Last Updated: 2019-06-07
Play Video: http://llai.cm.ntu.edu.tw/media/550
影片來源:
YouTube 或做實驗時用手機錄影
做法:
學長姐教的時候,學習的人負責錄影,並於事後
整理錄影
可以加字幕重點 (可以用 EverCam),也可以移除聲音 (降低心理門檻) 或配上背景音樂
提出問題 (例如,影片中哪些看不懂,可以用文字補充在重點說明)
整理實驗步驟,與要特別注意的地方 (從影片中截圖、整理文字重點)
最後再由教的人負責確認
參考的流程:
透過重點文字 + 圖片的編輯,補足影片細節的不足
容易造成實驗失敗的地方 (過去曾發生的案例),特別用紅色字標示
設計檢核清單,幫助新人實驗時可以有明確的指引 (建立工作時,複製檢核清單)
設計課程,將紅色的標示的重點,變成測驗題目
持續累積經驗,用 FAQ 將遇到的問題整理
Keypoint
要用到的試劑:PBS、medium、Trypsin、cell dye、FBS、DMSO
實驗前的準備
1.
解凍容器,把冰盒拿出來退冰
目的:
避免盒子太冰,細胞會瞬間凍壞
要退冰多久?
一定要退到室溫,建議至少提前 30 分鐘拿出來退冰比較保險
2.
準備 PBS、medium、trypsin
步驟:
準備 PBS、medium、trypsin
噴酒精消毒瓶子外圍 (避免污染),用紙巾擦乾
放到工作台
鬆開瓶蓋 (方便單手操作,
注意: 不可以將蓋子完全打開放旁邊,避免污染
)
開始實驗
3.
把原來的 medium 吸掉
目的:
舊的培養液裡面有廢物和死細胞 (保證品質和避免污染)
要換成抗凍的培養液
實驗步驟:
拿細胞
要換新的 tip,避免污染
把原來的 medium 吸到廢物桶
4.
PBS wash,吸掉
目的:
將舊的 medium 和廢物洗乾淨
實驗步驟:
吸取 3ml PBS
沿著 dish 壁加入 (為了避免直接沖到細胞)
加入後,蓋上蓋子輕輕旋轉,使 PBS 充分 rinse 所有細胞
吸掉 PBS
5.
把細胞切下來
實驗目的
將細胞從 dish 上切下來
實驗步驟
加 1 ml trypsin (直接「散佈」加在 dish 底部)
旋轉 dish,確保細胞都有接觸到 trypsin
放 37
o
C incubator 5 min (注意不要放太久)
利用空檔標示凍細胞要用的 tubes
6.
從 dish 中取出 cell
從 incubator 拿出剛剛的 dish
加 2 ml medium
沖一沖 dish,mix 均勻
特別注意:
dish 傾斜 +
來回沖、吸的動作,確保將 cell 沖下來
把 medium + cell 裝到 15ml 離心管
以下尚未編輯
7.
低速離心
5 min
,吸掉上清液
8.
加
1 ml medium
,數細胞,取約
10^6
個細胞
9.
800 ul
細胞
+ 100 ul FBS
加進凍細胞
tube
cell+ medium + FBS + DMSO = 1ml
10.
加
100 ul DMSO (
要避光
)
11.
Tube
放進冰盒,冰到
-80
℃
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Q1.
DMSO的作用是什麼?
00:00
1.
凍細胞
00:46
2.
放到 37 度C incubator 5 分鐘
Location
Media Center
...
Cell Freeze
Folder name
Cell Freeze
Author
李冠儀
Branch
賴亮全教授
Created
2019-06-05 10:16:00
Last Updated
2019-06-07 20:26:27
Duration
03:32
Reference
1
Media Center
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Cell Freeze
1.
凍細胞
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凍細胞_demo
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Freezing Cells: Cell Culture Basics