• 00:00 1.
    凍細胞
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    放到 37 度C incubator 5 分鐘
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凍細胞_demo
Duration: 03:32, Browse: 3833, Last Updated: 2019-06-07
影片來源:
YouTube 或做實驗時用手機錄影
 
做法:
學長姐教的時候,學習的人負責錄影,並於事後
  1. 整理錄影
    可以加字幕重點 (可以用 EverCam),也可以移除聲音 (降低心理門檻) 或配上背景音樂
  2. 提出問題 (例如,影片中哪些看不懂,可以用文字補充在重點說明)
  3. 整理實驗步驟,與要特別注意的地方 (從影片中截圖、整理文字重點)
  4. 最後再由教的人負責確認
 
參考的流程:
  1. 透過重點文字 + 圖片的編輯,補足影片細節的不足
  2. 容易造成實驗失敗的地方 (過去曾發生的案例),特別用紅色字標示
  3. 設計檢核清單,幫助新人實驗時可以有明確的指引 (建立工作時,複製檢核清單)
  4. 設計課程,將紅色的標示的重點,變成測驗題目
  5. 持續累積經驗,用 FAQ 將遇到的問題整理
Keypoint
  1. 要用到的試劑:PBS、medium、Trypsin、cell dye、FBS、DMSO
  2.  
     
    實驗前的準備
  3. 1.
    解凍容器,把冰盒拿出來退冰
    目的:
    避免盒子太冰,細胞會瞬間凍壞
     
    要退冰多久?
    一定要退到室溫,建議至少提前 30 分鐘拿出來退冰比較保險
  4. 2.
    準備 PBS、medium、trypsin
    步驟:
    1. 準備 PBS、medium、trypsin
    2. 噴酒精消毒瓶子外圍 (避免污染),用紙巾擦乾
    3. 放到工作台
    4. 鬆開瓶蓋 (方便單手操作,注意: 不可以將蓋子完全打開放旁邊,避免污染)
  5.  
     
    開始實驗
  6. 3.
    把原來的 medium 吸掉
    目的:
    1. 舊的培養液裡面有廢物和死細胞 (保證品質和避免污染)
    2. 要換成抗凍的培養液
     
    實驗步驟:
    1. 拿細胞
    2. 要換新的 tip,避免污染
    3. 把原來的 medium 吸到廢物桶
     
  7. 4.
    PBS wash,吸掉
    目的:
    將舊的 medium 和廢物洗乾淨
     
    實驗步驟:
    1. 吸取 3ml PBS
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    2. 沿著 dish 壁加入 (為了避免直接沖到細胞)
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    3. 加入後,蓋上蓋子輕輕旋轉,使 PBS 充分 rinse 所有細胞
       
    4. 吸掉 PBS
      8caf4158afb073a8d2b36c11608c4d5f.png
     
     
     
  8. 5.
    把細胞切下來
    實驗目的
    將細胞從 dish 上切下來
     
    實驗步驟
    1. 加 1 ml trypsin (直接「散佈」加在 dish 底部)
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    2. 旋轉 dish,確保細胞都有接觸到 trypsin
    3. 放 37oC incubator 5 min (注意不要放太久)
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    4. 利用空檔標示凍細胞要用的 tubes
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  9. 6.
    從 dish 中取出 cell
    1. 從 incubator 拿出剛剛的 dish
    2. 加 2 ml medium
    3. 沖一沖 dish,mix 均勻
      特別注意:
      dish 傾斜 + 來回沖、吸的動作,確保將 cell 沖下來
       
    4. 把 medium + cell 裝到 15ml 離心管
  10.  
     
    以下尚未編輯
  11. 7.
    低速離心5 min,吸掉上清液
  12. 8.
    1 ml medium,數細胞,取約10^6個細胞
  13. 9.
    800 ul細胞+ 100 ul FBS加進凍細胞tube
  14. cell+ medium + FBS + DMSO = 1ml
  15. 10.
    100 ul DMSO (要避光)
  16. 11.
    Tube放進冰盒,冰到 -80
Checklist
  • 00:00 1.
    凍細胞
  • 00:46 2.
    放到 37 度C incubator 5 分鐘
Location
Folder name
Cell Freeze
Author
李冠儀
Branch
賴亮全教授
Created
2019-06-05 10:16:00
Last Updated
2019-06-07 20:26:27
Duration
03:32
Reference
1